ПЦР смесь 2Х Fast Dye qPCR U Mastermix

Преимущества:
•Высокая чувствительность к небольшому числу копий ДНК
•Исключение ложно-положительных результатов
•Повышенная устойчивость к ингибиторам

Область применения:
• ПЦР с интеркалирующими красителями

Рекомендации к использованию:
Допускается 10 циклов заморозки/разморозки.

Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год
●От +2°С до +8°С – 14 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА

Мастер-микс для ПЦР 2X Fast Dye U готовая к использованию смесь для полимеразной цепной реакции с интеркалирующим красителем и детекцией в режиме реального времени. Мастер-микс содержит вещества, которые увеличивают время работы и процессивность ДНК-полимеразы Тад за счет повышения ее стабильности во время ПЦР. Наличие dUTP в реакционной смеси приводит к тому, что все продукты амплификации будут содержать в своем составе урацил. При этом UDG эффективно гидролизует урацил (апуринизация) из одно- и двухцепочечных молекул ДНК во время постановки реакции, предотвращая, таким образом, амплификацию продуктов предшествующих ПЦР (ампликонов), что позволяет избежать получения ложноположительных результатов. UDG инактивируется во время первого цикла денатурации ДНК и не препятствует амплификации продуктов текущей реакции. Мастер-микс для ПЦР 2X Fast Dye U содержит ДНК-полимеразу Тад, которая инактивирована антителами и не проявляет ферментативной активности во время приготовления реакционной смеси. Это приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. Активация фермента происходит во время первого цикла денатурации ДНК. В некоторых комплектациях мастер-микс может содержать референсный краситель ROX (в зависимости от прибора для количественной ПЦР конечная концентрация составляет 0,5 мкМ (High ROX) или 0,03 мкМ (Low ROX)).

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

От -24 до -16°C 1 год. • От +2 до +8°C 14 суток. • Допустимое число циклов замораживания/размораживания: 10


ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

ПЦР с интеркалирующим красителем


СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОДУКТА

Перед началом анализа важно учесть следующее:

1. При использовании зондов наибольшая эффективность ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени наблюдается при длине мишени 70-200 п.н.
2. Мастер-микс оптимизирован для конечного объема реакционной смеси 20 мкл. Если используются другие объемы реакционной смеси, необходимо скорректировать количество мастер-микса для ПЦР 2X Fast Dye U (см. таблицу 1).
3. Для обеспечения наилучших результатов рекомендуется анализировать каждый стандартный или испытуемый образец ДНК в трех повторах.
4. Проводят ПЦР в соответствии с параметрами, указанными в таблице 2.

Таблица 1. Схема ПЦР с использованием интеркалирующего красителя и детекцией результатов в режиме реального времени

*рекомендуемые концентрации для геномной ДНК человека


Таблица 2. Рекомендуемые условия амплификации для ПЦР с использованием интеркалирующего красителя и детекцией результатов в режиме реального времени

*Сбор данных FAM/EVA/SybrGreen.
**Температура отжига зависит от температуры плавления (Tm) праймеров. Обычно подходящие значения температуры отжига примерно на 2-5°C ниже, чем Тт праймеров. Рекомендуется применять температурный градиент.

Смотреть
Скачать