Diamant TaqD ДНК-полимераза

Преимущества:
•Высокочувствительная ПЦР
•Одностадийная ОТ-ПЦР
•Высокопроизводительность, специфичность, точность

Область применения:
●Мультиплексная ПЦР
●Рутинная ПЦР
●Амплификация ПЦР-фрагментов до 5 000 п.н.
●ПЦР-РВ с флуоресцентными зондами
●ПЦР-РВ с интеркалирующими красителями
●Введение метки в ДНК
●Получение ПЦР-продукта для АТ-клонирования
●Секвенирование по Сэнгеру

Концентрация:
5 еа/мкл с глицерином
20 еа/мкл без глицерина
Одной единицей определяется количество молекул фермента, включающих 15 нмоль дезоксинуклеотидтрифосфатов в растущую цепь ДНК за 30 минут при 74°С.

Буфер для хранения и разбавления:
20 mМ Tris-HCl (pH 8.0), 0.5 mМ EDTA, 100 mМ KCl, 50% glycerol, 0.5% Tween-20

Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год
●От +2°С до +8°С – 14 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
TaqD ДНК-полимераза представляет собой смесь высокоочищенной рекомбинантной ДНК-полимеразы Taq (Thermophilus aquaticus) и специфических моноклональных антител к данному ферменту. Благодаря наличию моноклональных антител TaqD ДНК-полимераза не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления ПЦР-смеси, что приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. При этом активация фермента происходит в процессе первого цикла денатурации ДНК.

TaqD ДНК-полимераза катализирует синтез ДНК в направлении от 5’- к 3’-концу растущей цепи; не обладает детектируемой корректирующей 3’-5’-экзонуклеазной активностью; имеет 5’-3’-экзонуклеазную активность.

TaqD ДНК-полимераза может поставляться в комплекте с 10-кратным буфером, состав которого оптимизирован для амплификации ДНК в стандартных условиях, а также c раствором 50 мМ MgCl2.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
• Мультиплекс-ПЦР;
• Низкокопийная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиолаб для получения оптимального результата, например, из линеек Fast Probe или One-Step);
• Высокоспецифичная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиолаб для получения оптимального результата, например, с полимеразой Blitz);
• ПЦР с интеркалирующими красителями (рекомендуем, M2-FDU-0.5).

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
Рекомендуется приготовить общую реакционную смесь для ПЦР, содержащую все компоненты смеси (воду, дНТФ, буфер, ДНК-полимеразу, праймеры) за исключением ДНК-матрицы. Объем реакционной смеси ПЦР рассчитывается исходя из числа реакций с 20%-избытком в расчете на ошибки аликвотирования. После того, как аликвоты ПЦР-смеси будут внесены в предварительно промаркированные ПЦРпробирки, в них добавляют соответствующую ДНК-матрицу.

1. Перед использованием разморозить и тщательно перемешать все компоненты ПЦР-смеси.
2. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1.
3. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 25 мкл.

Таблица 1. Состав реакционной смеси (20 мкл)

В зависимости от используемой ДНК-матрицы и задач исследования, состав реакционной смеси может быть оптимизирован:

- можно использовать любой стандартный ПЦР-буфер;
- концентрация MgCl2 может быть увеличена до 5 мкМ;
- для одной реакции объемом 25 мкл рекомендуется использовать 1 пг - 10 нг плазмидной, фаговой или бактериальной ДНК;
- концентрация ДНК-полимеразы Diamant TaqD может быть увеличена до 0,12 ед./ на реакцию.

4. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки.
5. Провести ПЦР.

Стандартная схема амплификации представлена в таблице 2.


Таблица 2. Программа амплификации (для ПЦР с двумеченными зондами)

* зависит от последовательности олигонуклеотидных праймеров и зонда

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Срок годности при соблюдении условий хранения при температуре от -24°С – -16°С – 1 год c даты производства.

Буфер для хранения и разведения
20 мМ Трис-HCl (pH 8,0); 100 мМ KCl; 0,5 мМ ЭДТА; 50 % глицерин; 0,5 % Tween-20

10Х буфер A
650 mM Трис-HCl (pH 8.8), 166 mM (NH4)2SO4, 0,5 % Tween-20

Смотреть
Скачать