ПЦР смесь 2X Blitz Mastermix

Преимущества:
• Высокая скорость синтеза ДНК
• Высокая процессивность
• Высокая точность
• Способность амплифицировать длинные фрагменты (до 20 00 п.н.)
• Устойчивость к ингибиторам

Область применения:
• Высокоточная ПЦР
• Амплификация длинных и протяжённых фрагментов ДНК
• "Прямая" ПЦР без этапа предварительной очистки образцов
• Амплификация NGS-библиотек

Рекомендации к использованию:
Допускается 10 циклов заморозки/разморозки.

Условия хранения и транспортировки:
• От -24°С до -16°С – 1 год
• От +2°С до +8°С – 14 дней

Описание продукта
2X Blitz MasterMix представляет собой готовую смесь для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) с повышенной точностью синтеза ДНК.
В состав 2X Blitz MasterMix входят все необходимые компоненты:

• Термостабильная ДНК-полимераза
• Оптимизированный буфер
• дНТФ
• MgCl_2

ДНК-полимераза, входящая в состав 2X Blitz MasterMix — термостабильный фьюжн Pfu ДНК-полимеразы и ДНК-связывающего домена белка SSo7d.
ДНК-связывающий домен стабилизирует комплекс ДНК-полимеразы с матрицей, что приводит к повышению процессивности, скорости синтеза, точности и устойчивости фермента к высокой ионной силе раствора. Кроме того, Blitz ДНК-полимераза устойчива к ингибиторам и может быть использована в «прямой» ПЦР без предварительной очистки матрицы (устойчива к 10% крови). Фермент не ингибируется дУТФ.
2X Blitz MasterMix катализирует синтез ДНК в направлении от 5'- к 3'-концу растущей цепи; обладает корректирующей 3'-5'-экзонуклеазной активностью; не имеет 5'-3'-экзонуклеазной активности (не подходит TaqMan-дизайн зондов, подходит LUX, Sandwich-дизайн зондов или интерколирующие красители).
2X Blitz MasterMix обладает повышенной скоростью синтеза ДНК (до 4 000 п.о./мин) и способен амплифицировать фрагменты длинной более 40 000 п.о.
Область применения:

• Высокоточная ПЦР
• Амплификация длинных фрагментов
• «Прямая» ПЦР (без предварительной очистки матрицы)
• Подготовка библиотек ДНК в методах секвенирования нового поколения (NGS)

ВНИМАНИЕ! Blitz ДНК-полимераза не обладает горячим стартом, мы рекомендуем подготовить мастермикс на льду. Для уменьшения ошибки пипетирования при постановке нескольких параллельных реакций рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс. Объем ПЦР-премикса рассчитывается исходя из числа реакций с добавлением одного дополнительного образца. После того, как аликвоты ПЦР-премикса будут внесены в предварительно промаркированные ПЦР-пробирки, в них добавляют соответствующую ДНК-матрицу.
Стандартный протокол использования

1. Перед использованием разморозить и тщательно перемешать все компоненты мастермикса путем переворачивания пробирки. Не вортексировать.
2. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 50 мкл.

Таблица 1. Состав реакционной смеси для ПЦР амплификации длинных фрагментов (50 мкл)

*2X Blitz Mastermix содержит ацетат магния (в конечной концентрации 3 мМ) и dNTP (в конечной концентрации 0,2 мМ).
В зависимости от особенностей используемой ДНК-матрицы и задач исследования, состав реакционной смеси может быть оптимизирован:

• оптимальная концентрация праймеров может находиться в диапазоне 0,05–1 мкМ;
• на одну реакцию объемом 50 мкл рекомендуется использовать 1 пг – 10 нг плазмидной, фаговой или бактериальной ДНК; 1–100 нг геномной эукариотической ДНК;

Допускается использование праймеров с другой начальной концентрацией. Рекомендуемый объем ПЦР-смеси для одной реакции — 50 мкл.

Рекомендуемые условия амплификации

Таблица 2а. Рекомендуемые условия амплификации для рутинной ПЦР

Таблица 2б. Рекомендуемые условия амплификации для рутинной ПЦР (для библиотек/длинных фрагментов)

*2X Blitz Mastermix содержит ацетат магния (в конечной концентрации 3 мМ) и dNTP (в конечной концентрации 0,2 мМ).
В зависимости от особенностей используемой ДНК-матрицы и задач исследования, состав реакционной смеси может быть оптимизирован:

• оптимальная концентрация праймеров может находиться в диапазоне 0,05–1 мкМ;
• на одну реакцию объемом 50 мкл рекомендуется использовать 1 пг – 10 нг плазмидной, фаговой или бактериальной ДНК; 1–100 нг геномной эукариотической ДНК;

Допускается использование праймеров с другой начальной концентрацией. Рекомендуемый объем ПЦР-смеси для одной реакции — 50 мкл.

Рекомендуемые условия амплификации

Таблица 2а. Рекомендуемые условия амплификации для рутинной ПЦР

Таблица 2б. Рекомендуемые условия амплификации для рутинной ПЦР (для библиотек/длинных фрагментов)
* — в зависимости от температуры плавления праймеров; — При амплификации библиотек время элонгации подбирается эмпирически.

Дополнительная информация
Буфер для хранения и разведения: 20 мМ Трис-HCl (pH 8,0); 100 мМ KCl; 0,5 мМ ЭДТА; 50 % глицерин; 0,5 % Tween-20
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

• Транспортировка допускается до 14 дней при температуре не выше +2°C – +8°C.
• Срок годности при соблюдении условий хранения: год с даты производства при температуре от -24°C до -16°C.
• Допускается заморозка/оттаивание 2X Blitz MasterMix не более 10 раз.

Смотреть
Скачать