Diamant TaqА ДНК-полимераза

Преимущества:
• Амплификация ПЦР-фрагментов до 5000 п.н.

Область применения:
●Мультиплексная ПЦР
●Рутинная ПЦР
●Высокочувствительная ПЦР
●ПЦР-РВ с флуоресцентными зондами
●ПЦР-РВ с интеркалирующими красителями

Концентрация:
5 еа/мкл (100 еа/мкл для фермента без глицерина)
Одной единицей определяется количество молекул фермента, включающих 15 нмоль дезоксинуклеотидтрифосфатов в растущую комплементарную цепь ДНК за 30 минут при 74°С.

Буфер для хранения и разведения:
20 mМ Tris-HCl (pH 8.0), 0.5 mМ EDTA, 100 mМ KCl, 50% glycerol, 0.5% Tween-20

Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год
●От +2°С до +8°С – 14 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
ДНК-полимераза TaqA представляет собой смесь высокоочищенной рекомбинантной ДНКполимеразы Taq (Thermophilus aquaticus) и специфического низкомолекулярного ингибитора активности.

ДНК-полимераза TaqA не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления ПЦР-смеси, что приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. Ингибирование ДНК-полимеразы сохраняется при инкубировании с субстратом в течение 1 ч при 37 оС. При этом активация фермента происходит в процессе первого цикла денатурации ДНК.

ДНК-полимераза TaqA катализирует синтез ДНК в направлении от 5’- к 3’-концу растущей цепи; не обладает детектируемой корректирующей 3’-5’-экзонуклеазной активностью; имеет 5’-3’-экзонуклеазную активность.

ДНК-полимераза TaqA обеспечивает высокий выход ПЦР-продукта при использовании различных ДНК-матриц, наличие Hot-старт инактивации полимеразы снижает риск неспецифических продуктов.

ДНК-полимераза TaqA может поставляться в комплекте с 10-кратным буфером, состав которого оптимизирован для амплификации ДНК в стандартных условиях, а также раствором 50мМ MgCl2.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
• Мультиплексная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиоЛаб для получения оптимального результата, например, из линеек Fast Probe или One-Step);
• Рутинная ПЦР (рекомендуем, ПЦР-смесь для нанесения на агарозный гель-paR-BA);
• Высокоспецифичная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиоЛаб для получения оптимального результата, например, с полимеразой Blitz);
• ПЦР с интеркалирующими красителями (рекомендуем, M2-FDU-0.5);

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
Рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс, содержащий все компоненты смеси (воду, дНТФ, буфер, ДНК-полимеразу, праймеры). Объем ПЦР-премикса рассчитывается исходя из числа реакций с запасом на ошибки пипетирования. После того, как аликвоты ПЦР-премикса будут внесены в предварительно промаркированные ПЦР-пробирки (рекомендуем пластик для ПЦР Omnitip и AHN).

1. Перед использованием разморозить и тщательно перемешать все компоненты ПЦР-смеси.
2. Приготовьте реакционную смесь согласно Таблице 1 (для рутинной ПЦР) и Таблице 2 (для ПЦР с двумеченными зондами).
3. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 25 мкл.

Таблица 1. Состав реакционной смеси (для рутинной ПЦР) (25 мкл)


Таблица 2. Состав реакционной смеси (для ПЦР с двумеченными зондами) (25 мкл)


4. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки.
5. Провести ПЦР.

Рекомендуемые условия амплификации для анализа ПЦР-продуктов представлены в Таблице 3 (для рутинной ПЦР) и Таблице 4 (для ПЦР с двумеченными зондами).

Таблица 3. Программа амплификации (для рутинной ПЦР)

* в зависимости от температуры плавления праймеров;
** длина амплифицируемого фрагмента не должна превышать 5 000 п.о

Таблица 4. Программа амплификации

* зависит от последовательности олигонуклеотидных праймеров и зонда
** стадия может быть опущена для сокращения времени реакции

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Транспортировка допускается до 7 дней при температуре не выше 25°С

Срок годности при соблюдении условий хранения при температуре от -24°С – -16°С – 1 года c даты производства

Буфер для хранения и разведения
20мМ Трис-HCl (pH 8,0); 100мМ KCl; 0,5мМ ЭДТА; 50% глицерин; 0,5% Tween-20

10Х буфер A
650mM Трис-HCl (pH 8.8), 166mM (NH4)2SO4, 0,5% Tween-20

Смотреть
Скачать