Набор PuriMag P для выделения нуклеиновых кислот

Преимущества:
• Выход продукта >75%

Область применения:
Выделение и очистка нуклеиновых кислот:
- на магнитном штативе
- на роботизированной станции

Условия хранения и транспортировки:
• При комнатной температуре ниже + 25°С - 1 год

Состав набора:
Магнитные частицы P
1 пробирка - 1 мл
Буфер для лизиса PTL
1 банка - 45 мл
Промывочный буфер I PFW
1 банка - 45 мл
Промывочный буфер II PSW
1 банка - 45 мл
Буфер для элюции PEB
1 банка - 12 мл

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
Набор для выделения тотальной ДНК/РНК PuriMag P позволят эффективно выделять из клинического материала как РНК, так и ДНК. Набор для выделения тотальной ДНК/ РНК PuriMag P позволяет работать с образцами объемом до 100 мкл. Очистка РНК/ДНК с использованием набора для выделения тотальной ДНК/РНК PuriMag P проста, удобна и не требует дополнительных реагентов. Набор предназначен для исследования 100 образцов объемом по 100 мкл (таблица 1).

Таблица 1. Компонентный состав набора для выделения тотальной ДНК/РНК PuriMag Р


ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Набор для выделения тотальной ДНК/РНК PuriMag P разработан непосредственно для выделения тотальной РНК/ДНК из плазмы и сыворотки крови, содержащей низкие титры патогенных микроорганизмов. Кроме того, набор позволяет выделять нуклеиновые кислоты из мазков, соскобов и выделений слизистых оболочек мочеполового, дыхательного и пищеварительного трактов, гомогенизированных образцов тканей, а также из биологических жидкостей (моча, секрет предстательной железы, спинно-мозговая жидкость) для последующего исследования методами ПЦР и ОТ-ПЦР, в том числе с детекцией результатов в режиме реального времени.

ПРИНЦИП ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК/РНК С ПОМОЩЬЮ НАБОРА
Методика выделения основана на связывании нуклеиновых кислот с магнитными частицами в присутствии хаотропных солей и их последующем элюировании в буфере с низким содержанием солей.

При работе с реагентами из набора для выделения тотальной ДНК/РНК PuriMag P необходимо соблюдать меры безопасности, установленные для соответствующей области клинической лаборатории ПЦР-диагностики

НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ РУЧНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
• ламинарный бокс или ПЦР-бокс;
• термошейкер, сухой нагревательный блок для микроцентрифужных пробирок с температурой нагрева до 65 °C;
• микроцентрифуга для пробирок со скоростью вращения не менее 12 000 об/мин;
• магнитный штатив
• вортекс;
• гомогенизатор;
• Аспиратор с сосудом-ловушкой для удаления надосадочной жидкости;
• пипетки с переменным объемом (10–1000 мкл);
• наконечники для пипеток (во избежание перекрестного загрязнения; рекомендуются наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами);
• микроцентрифужные пробирки вместимостью 1,5 или 2 мл;
• штативы для микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 или 2 мл;
• холодильник с морозильной и холодильной камерой (температура от –24 - –16°С и +4 - +8 °С);
• одноразовые неопудренные перчатки;
• бак для отходов;
• дезинфицирующая жидкость, используемая в лаборатории в соответствии с местными требованиями.

ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ РАБОЧЕЙ СТАНЦИИ: рекомендуется использовать системы типа Nucleic Acid Purifier 16 (Magbio Genomics) или KingFisher Flex System (Thermo Fisher Scientific). При работе с РНК/ДНК следует использовать расходные материалы с квалификацией «без РНКаз» и «без ДНКаз».

ПРОТОКОЛ ВЫДЕЛЕНИЯ
Пробоподготовка

Собирают образцы в стерильные пробирки; необходимо немедленно начать выделение или заморозить образцы при температуре от –20 до –80 °C. Транспортировка клинических образцов должна осуществляться в соответствии с местными правилами транспортировки возбудителей заболеваний.

Для приготовления плазмы крови берут образец цельной крови в пробирку с антикоагулянтом, например, ЭДТА. Удаляют клетки крови путем центрифугирования плазмы крови в течение 10 мин со скоростью 1000–2000 g в центрифуге с охлаждением (рекомендуется). Полученную надосадочную жидкость маркируют «Плазма крови».

Для приготовления сыворотки крови берут цельную кровь в микроцентрифужную пробирку. После сбора цельной крови дают ей свернуться, оставляя в покое при комнатной температуре на 30 мин. Удаляют сгусток путем центрифугирования в течение 10 мин со скоростью 1000– 2000 g в центрифуге с охлаждением (рекомендуется). Полученную надосадочную жидкость маркируют «Сыворотка крови».

Образцы мочи требуют предварительной: рекомендуется центрифугировать 1,5 мл мочи со скоростью 10 000 об/мин, слить надосадочную жидкость и ресуспендировать осадок в 90 мкл буфера ТЕ или 0,9 % раствора NaCl.

Для приготовления экстракта тканей рекомендуется получить 10 % (масс./об.) суспензию ткани в 1 мл 0,9 % раствора NaCl, гомогенизировать образец в течение 3 мин при энергичном встряхивании и выполнить центрифугирование в течение 5 мин с максимальной скоростью (10 000–14 000 об/мин). Надосадочную жидкость можно использовать для последующей экстракции нуклеиновых кислот.

Образцы тканей необходимо тщательно обработать с помощью гомогенизатора непосредственно перед экстракцией ДНК/РНК.

Экстракция РНК/ДНК из образцов объемом 100 мкл с использованием магнитного штатива
1. Осадок / седиментационный слой кристаллов (если имеется) в буфере PTL и (или) PFW необходимо растворить путем нагревания до температуры 55–60 °C при осторожном перемешивании. Перед началом процедуры экстракции осторожно ресуспендируют магнитные шарики P на вортексе в течение 10 с.
2. Добавляют 10 мкл магнитных шариков P и 10 мкл внутреннего контроля экстракции (если это требуется конкретным набором для ПЦР) в пробирку.
3. Добавляют 100 мкл образца в пробирку (см. раздел «Приготовление испытуемых образцов»). При необходимости добавляют 100 мкл буфера PEB в пробирку с отрицательным контролем для экстракции.
4. Добавляют 450 мкл буфера PTL в пробирку.
5. Содержимое пробирки перемешивают на вортексе в течение 5 с и инкубируют при температуре 65 °C в течение 5 мин при постоянном (рекомендуется) или периодическом (импульсное вихревое, 2 раза) перемешивании.
6. Удаляют капли с внутренней стороны крышки путем кратковременного центрифугирования на минимальной скорости. Помещают пробирки на магнитный штатив для разделения на 60 с. Осторожно удаляют надосадочную жидкость, не касаясь магнитных шариков P.
7. Добавляют 450 мкл буфера PFW и перемешивают содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с.
8. Удаляют капли с внутренней стороны крышки путем кратковременного центрифугирования на минимальных скоростях. Переносят пробирки на магнитный штатив для разделения на 60 с. Осторожно удаляют надосадочную жидкость, не касаясь магнитных шариков P.
9. Добавляют 450 мкл буфера PSW и перемешивают содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с.
10. Удаляют капли с внутренней стороны крышки путем кратковременного центрифугирования на минимальных скоростях. Переносят пробирки на магнитный штатив для разделения на 60 с. Осторожно удаляют надосадочную жидкость, не касаясь магнитных шариков P.
11. Добавляют 100 мкл буфера PEB и перемешивают содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с.
12. Инкубируют пробирки при температуре 65 °C в течение 5 мин при постоянном (рекомендуется, на термошейкере, 900 об/мин) или периодическом (на вортексе по 5 с каждые 2 мин) перемешивании. После завершения инкубации перемешивают содержимое пробирок на вортексе в течение 2 с.
13. Удаляют капли с внутренней стороны крышки путем кратковременного центрифугирования на минимальной скорости.
14. Помещают пробирки на магнитный штатив для разделения на 2 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенную РНК и ДНК, готовую для обратной транскрипции и ПЦР.

Для долгосрочного хранения образцов настоятельно рекомендуется переносить надосадочную жидкость в новые пробирки. Допустимые сроки хранения образцов при разных значениях температуры:–24 до –18 ° C — 1 год; –80 °C — длительный период времени.
Только для исследовательской работы. Товар не предназначен для медицинских целей!

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
При комнатной температуре 20-25 °C - 1 год.

Смотреть
Скачать