RevM Hot Start обратная транскриптаза (ревертаза)

Преимущества:
• Эффективна для GC-богатых РНК-матриц
• Допускается готовить MasterMix при комнатной температуре
• Снижение активности при температуре ниже 37°С
• Температурный оптимум 55°С
• Высокая продуктивность
Синтез до 12 т.п.н.

Область применения:
• Одностадийная ОТ-ПЦР

Активность:
5 еа/мкл (5-100 еа/мкл по запросу)
За одну единицу принимается количество фермента, обеспечивающее линейность обнаружения фага MS2 в пределах 10^1-10^9 копий на реакцию.

Буфер для хранения и разбавления:
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.5 mM EDTA, 100 mM KCl; 50 % glycerol; 0.5 % Tween-20, 1 mM TCEP.

Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год
● RT (< +25°С) – 14 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА

Ревертаза RevM hot-start представляет собой генетически модифицированную обратную транскриптазу вируса лейкоза мышей Молони (MMLV), осуществляющую синтез комплементарной цепи ДНК (кДНК) на матрице одноцепочечной РНК. Благодаря наличию нескольких мутаций у фермента подавлена активность РНКазы Н и повышена термостабильность.

Фермент обладает сниженной активностью при температуре ниже 37°C и имеет оптимальную рабочую температуру 55°С. Инактивация происходит через 10 минут при 80°С. Для снижения неспецифической активности фермента в процессе приготовления реакционной смеси он блокирован при помощи специфического аптамера.

Ревертаза RevM hot-start по сравнению с MMLV дикого типа обеспечивает более высокий выход кДНК, позволяет амплифицировать более длинные фрагменты (до 12 000 п.о.), имеет улучшенную эффективность и продуктивность при использовании GC-богатых РНК-матриц.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Одностадийный ОТ-ПЦР

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОДУКТА

Для уменьшения ошибок пипетирования при постановке нескольких параллельных реакций рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс, содержащий все компоненты смеси (зонд, вода, дНТФ, буфер TG, праймеры, ревертаза, ДНКполимераза, хлорид магния). Рекомендуем использовать поли-Т и рандомные праймеры для синтеза кДНК. В научных целях возможно использование специфических праймеров для синтеза кДНК, но мы рекомендуем, в данном случае, добавлять фермент после стадии денатурации и специфического отжига. Объем ПЦРпремикса рассчитывается исходя с запасом на ошибки пипетирования. При работе используйте реагенты, не содержащие РНКазы, включая высокоочищенную воду (RW1-50) и пластик для ПЦР Omnitip и AHN. Перед использованием разморозить все компоненты смеси.

1. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1.
2. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки.
3. Провести реакцию обратной транскрипции, согласно таблице 2 и таблице 3.

Таблица 1. Состав реакционной смеси для одностадийной ПЦР-РВ (25 мкл)


Таблица 2. Рекомендуемые условия для Random и олиго(dТ)16-20 праймеров


Таблица 3. Рекомендуемые условия для ген-специфических праймеров



Для последующего анализа кДНК с применением ПЦР-РВ рекомендуется использовать не более 2 мкл полученного образца на реакцию амплификации объемом 25 мкл.

Образец первой цепи кДНК может храниться не менее месяца при температуре –20 оС. Более длительное хранение осуществляется при температуре –70 оС.

Буфер для хранения и разведения:
20 мМ Трис-HCl (pH 8,0); 0,5 мМ ЭДТА; 100 мМ KCl; 50 % глицерин; 0,5 % Tween-20; 1 мМ TCEP

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

Транспортировка допускается до 7 дней при температуре не выше 4-8°С.
Срок годности при соблюдении условий хранения при температуре от -24°С – -16°С – 1 год c даты производства.

Смотреть
Скачать