Набор PuriMag Vet для выделения нуклеиновых кислот

Преимущества:
• Выход продукта >75%

Область применения:
Выделение и очистка нуклеиновых кислот:
- на магнитном штативе
- на роботизированной станции

Условия хранения и транспортировки:
• От +2°C до +24°C - 1 год
• От +24°C до +37°C - 5 дней

Состав набора:

Набор PuriMag Vet для выделения нуклеиновых кислот


НАЗНАЧЕНИЕ
Набор для выделения общей ДНК/РНК PuriMag Vet на основе магнитного сорбента (МГС) предназначен для эффективного выделения общей РНК и ДНК из широкого спектра ветеринарных источников. Набор совместим с многочисленными типами образцов, включая: гомогенаты мышечной ткани; цельную кровь, плазму и сыворотку; фекальные мазки; мазки и пробы; слюну и мочу; конъюнктивальные выделения и спинномозговую жидкость; членистоногих; воду и образцы корма/фуража.

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Набор для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet основан на магнитном сорбенте и позволяет выделять нуклеиновые кислоты из различных материалов. Он также полезен для выделения небольших количеств РНК/ДНК.
Очистка РНК/ДНК с помощью набора для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet проста и удобна (время экстракции 1 образца – не более 20 минут) и не требует дополнительных реагентов.
Набор для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet позволяет проводить очистку РНК/ДНК вручную (с помощью магнитного штатива или центрифуги) или в автоматическом режиме с использованием открытых роботизированных станций, таких как Auto-Pure Mini (Allsheng), Auto-Pure 96/32 (Allsheng), KingFisher Flex (Thermofisher Scientific), Tecan Freedom EVO (Tecan) или их аналогов.
Набор для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet предназначен для проведения исследований 100 образцов объемом 100 мкл (таблица 1).

Таблица 1. Состав набора для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet

 
ПРИНЦИП РАБОТЫ
Метод выделения нуклеиновых кислот с использованием набора для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet основан на связывании нуклеиновых кислот с МГС в присутствии хаотропных солей и их последующей элюции в низкосолевой буфер.
 
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При работе с набором для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet необходимо соблюдать меры безопасности, установленные для соответствующей области деятельности клинической лаборатории ПЦР-диагностики.
 
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
● ламинарный бокс или ПЦР-бокс
● термошейкер для микроцентрифужных пробирок с температурой нагрева до 65 °C
● микроцентрифуга для пробирок со скоростью вращения не менее 10 000 x g
● пипетки с регулируемым объемом (10–1000 мкл)
● наконечники для пипеток (для предотвращения перекрестного загрязнения необходимо использовать наконечники с аэрозольным барьером)
● микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл или 2 мл
● штативы для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5 мл или 2 мл
● магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5 мл или 2 мл
● холодильник с морозильной камерой (температура от -24 °C до +8 °C)
● одноразовые перчатки без талька
● дезинфицирующая жидкость используется в вашей лаборатории в соответствии с нормативными требованиями
● система очистки нуклеиновых кислот auto-Pure Mini (Allsheng, кат. № AS-17170-00) или аналоги
● 96-луночный планшет:
AHN myPlate® с глубокими лунками, 2,2 мл, квадратные лунки, V-образное дно, тип Kingfisher (AHN, кат. № 3-226-04-0) или 96-луночный планшет для Auto-Pure 96/Mini/S32 (Allsheng, кат. № AS-17061-02).
● 6-луночная колонка для образцов (Magbio, кат. № MBNAP16-8W-100) или аналоги.
● 8-позиционный гребенчатый наконечник (Magbio, кат. № MBNAP16-MC-50) или аналоги.
При работе с РНК необходимо использовать расходные материалы со специальной маркировкой «Без РНКаз», ​​«Без ДНКаз».

ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ДЛЯ ЭКСТРАКЦИИ
 
Сбор, транспортировка и хранение материалов для исследований осуществляется в соответствии с действующими техническими регламентами, методическими рекомендациями и инструкциями.
Некоторые виды собранных жидких образцов (кровь, плазма, сыворотка, спинномозговая жидкость и др.) не требуют предварительной обработки и могут храниться и транспортироваться в соответствии со стандартом.
Образцы мочи необходимо хранить и транспортировать в соответствии с инструкциями производителя среды.
Образцы мочи требуют предварительной обработки в соответствии с общепринятыми рекомендациями. Рекомендуется центрифугировать 1,5 мл мочи при 10 000 об/мин в течение 10 мин, удалить надосадочную жидкость и ресуспендировать осадок в 90 мкл буфера TE или 0,9% NaCl.
Образцы воды требуют предварительной обработки в соответствии с общепринятыми рекомендациями. Рекомендуется центрифугировать 1,5 мл воды при 10 000 об/мин в течение 15 мин, удалить надосадочную жидкость и ресуспендировать осадок в 50 мкл буфера TE или 0,9% NaCl.

Образцы воды требуют предварительной обработки в соответствии с общепринятыми рекомендациями. Рекомендуется центрифугировать 1,5 мл воды при 10 000 об/мин в течение 15 мин, удалить надосадочную жидкость и ресуспендировать осадок в 50 мкл буфера TE или 0,9% NaCl. Для приготовления экстракта из корма или тканей рекомендуется приготовить 10% (вес/объем) суспензию ткани в 1 мл 0,9% NaCl с добавлением стеклянных шариков, гомогенизировать образец в течение 3 минут при интенсивном встряхивании и центрифугировать в течение 5 минут на максимальной скорости (10000-14000 об/мин). Надосадочную жидкость можно использовать для последующей экстракции нуклеиновых кислот.
Рекомендуется предварительно промыть образцы клещей в 70% этаноле с помощью вихревого перемешивания для удаления потенциальных ингибиторов ПЦР, содержащихся в кутикуле. Для приготовления экстракта из членистоногих рекомендуется приготовить 10% (вес/объем) суспензию членистоногих в 0,5 мл 0,9% NaCl с добавлением стеклянных шариков, гомогенизировать образец в течение 3 минут при интенсивном встряхивании и центрифугировать в течение 5 минут на максимальной скорости (10000-14000 об/мин). Надосадочную жидкость можно использовать для последующей экстракции нуклеиновых кислот.

Для мазков кала мы рекомендуем поместить мазок в пробирку, содержащую 0,8 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Встряхивайте пробирку на вортексе в течение 20-30 секунд. Извлеките мазок из пробирки. Центрифугируйте пробирку с образцом в течение 1 минуты при 1000 g для удаления крупных примесей. Перенесите надосадочную жидкость в чистую пробирку. Образец готов к дальнейшему выделению.
Все образцы следует тщательно гомогенизировать путем встряхивания на вортексе непосредственно перед экстракцией ДНК/РНК.

ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК НА МАГНИТНОМ ШТАТИВЕ
Установите температуру термостата на 65 °C.
1. МГС, встряхивая на вортексе в течение 10 секунд, перед началом процедуры экстракции.
2. Приготовьте смесь магнитного сорбента и экзогенного внутреннего контроля (EIC — если требуется для конкретного ПЦР-набора) в следующем соотношении на образец:
10*(N+1) мкл МГС + 10*(N+1) мкл EIC (при необходимости),
где N — общее количество образцов, включая NEC (контроль отрицательной экстракции), в пробирке объемом 1,5–2 мл. Перемешайте полученное содержимое с помощью вихревого перемешивателя.
3. Добавьте 20 мкл (10, если EIC не требуется) смеси (шаг 2) в пробирки с образцами.
4. Добавьте 100 мкл образца в каждую пробирку (см. раздел «Подготовка образцов»). Добавьте 100 мкл буфера PEB в пробирку с пометкой NEC (контроль отрицательной экстракции).
5. Добавьте 450 мкл буфера ETL в каждую пробирку.
6. Перемешайте содержимое пробирок, используя импульсный вихревой шейкер в течение 5 с, и инкубируйте при 65°C в течение 5 мин с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин).
7. Удалите капли с внутренней стороны крышки, кратковременно центрифугируя на низкой скорости. Поместите пробирки в магнитный штатив для разделения на 60 с. Осторожно удалите надосадочную жидкость, не касаясь МГС.
8. Добавьте 450 мкл буфера PFW и перемешайте содержимое пробирок вихревым шейкером в течение 5 с.
9. Удалите капли с внутренней стороны крышки, кратковременно центрифугируя на низкой скорости. Поместите пробирки в магнитный штатив для разделения на 60 с. Осторожно удалите надосадочную жидкость, не касаясь МГС.
10. Добавьте 450 мкл буфера ESW и перемешайте содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с.
11. Удалите капли с внутренней стороны крышки, кратковременно центрифугируя на низкой скорости. Поместите пробирки в магнитный штатив на 60 с. Осторожно удалите надосадочную жидкость, не касаясь МГС.
12. Высушите МГС с открытыми крышками в течение 5 мин при 65°C с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин).
13. Добавьте 50 мкл буфера PEB и перемешайте содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с. При необходимости объем буфера PEB можно увеличить до 100 мкл.
14. Инкубируйте пробирки при 65°C в течение 5 мин с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин). После завершения инкубации перемешайте содержимое пробирок на вортексе в течение 5 с.*
15. Удалите капли с внутренней стороны крышки, кратковременно центрифугируя на низкой скорости. Поместите пробирки в магнитный штатив на 2 мин. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК, готовые для обратной транскрипции и ПЦР.
Настоятельно рекомендуется перенести надосадочную жидкость в новые пробирки для длительного хранения образцов. Образцы можно хранить в течение 24 часов при температуре от +4°C до +8°C, или в течение 1 года при температуре от -24°C до -18°C, или при -80°C в течение длительного периода.

 

ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК С ПОМОЩЬЮ ЦЕНТРИФУГИ

Установите температуру на термостате на 65 °C.

1. Если буфер ETL и/или буфер PFW содержат кристаллический осадок, его необходимо растворить нагреванием до 40 °C при осторожном перемешивании. Перед началом процедуры экстракции ресуспендируйте МГС, перемешивая их на вортексе в течение 10 с.
2. Приготовьте смесь магнитного сорбента и экзогенного внутреннего контроля (EIC - если требуется для конкретного ПЦР-набора) в следующем соотношении на образец:
10*(N+1) мкл МГС + 10*(N+1) мкл EIC (если требуется),
где N – общее количество образцов, включая NEC (отрицательный контроль экстракции), в пробирке объемом 1,5-2 мл. Перемешайте полученное содержимое на вортексе.
3. Добавьте 20 мкл (10, если EIC не требуется) смеси (шаг 2) в пробирки с образцами.
4. Добавьте 100 мкл образца в каждую пробирку (см. раздел «Подготовка образцов»). Добавьте 100 мкл буфера PEB в пробирку с маркировкой NEC (отрицательный контроль экстракции).
5. Добавьте 450 мкл буфера ETL в каждую пробирку.
6. Перемешайте содержимое пробирок, используя импульсный вихревой шейкер в течение 5 с, и инкубируйте при 65°C в течение 5 мин с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин).
7. Осадите МГС в течение 30 секунд при 5000 x g, удалите надосадочную жидкость.
8. Добавьте 450 мкл буфера PFW и перемешайте содержимое пробирок в течение 5 с.
Осадите МГС в течение 30 секунд при 5000 x g, удалите надосадочную жидкость.
9. Добавьте 450 мкл буфера ESW и перемешайте содержимое пробирок в течение 5 с.
11. Осадите МГС в течение 30 секунд при 5000 x g, удалите надосадочную жидкость.
12. Высушите МГС с открытыми крышками в течение 5 минут при 65°C с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин).
13. Добавьте 50 мкл буфера PEB и перемешайте содержимое пробирок в течение 5 секунд. При необходимости объем буфера PEB можно увеличить до 100 мкл.
14. Инкубируйте пробирки при 65°C в течение 5 минут с помощью термошейкера (рекомендуется 1200 об/мин). После завершения инкубации перемешайте содержимое пробирок в течение 5 секунд.
15. Осадите МГС в течение 30 секунд при 10 000 x g. Супернатант содержит очищенные РНК и ДНК, готовые для обратной транскрипции и ПЦР.
Настоятельно рекомендуется перенести супернатант в новые пробирки для длительного хранения образцов. Образцы можно хранить в течение 24 часов при температуре от +4°C до +8°C, или в течение 1 года при температуре от -24°C до -18°C, или при -80°C в течение длительного периода.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ
Транспортировка и хранение компонентов набора для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet осуществляются при комнатной температуре (≤25°C). Набор для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet может перевозиться любым видом транспорта в условиях, обеспечивающих его безопасность, в соответствии с правилами перевозки грузов для данного вида транспорта.
Срок годности набора для выделения ДНК/РНК PuriMag Vet составляет 12 месяцев с даты изготовления. Если повреждена внешняя картонная упаковка транспортировочной коробки, но пластиковая упаковка не повреждена, набор пригоден к использованию. Если повреждена пластиковая упаковка, набор непригоден к использованию и подлежит утилизации.

Полная инструкция с настройками для автоматической станции Auto-Pure Mini (Allsheng) доступна по запросу через менеджеров БелбБиолаб.