ПЦР смесь 5Х Fast Probe qPCR U Mastermix

Преимущества:
•Высокая чувствительность реакции вплоть до единичных копий ДНК
•Повышенная устойчивость к ингибиторам       
•Предотвращение ложно-положительных результатов
Область применения:        
•Высокочувствительная ПЦР        
•ПЦР с флуоресцентными зондами         
•Мультиплексная ПЦР       
•Рутинная ПЦР        
Рекомендации к использованию:
Допускается 10 циклов заморозки/разморозки.
Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
5X Fast Probe qPCR Mastermix U представляет собой готовую к использованию смесь для количественной и/или качественной ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (далее ПЦР-РВ).

В состав 5X Fast Probe qPCR Mastermix U входят следующие компоненты:

• термостабильная ДНК-полимераза Тада с «горячим стартом» (#Е-ТАР-50, БелБиоЛаб); дНТФ, включая дУТФ;
• урацил-ДНК-гликозилаза (UDG);
• MgCl2 (конечная концентрация в реакционной смеси 5 мм); оптимизированный буфер.

Использование инактивированной ДНК-полимеразы, которая не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления ПЦР-смеси, приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. Активация фермента происходит в процессе первого цикла денатурации ДНК. Наличие в реакционной смеси дУТФ приводит к тому, что все продукты амплификации будут содержать в своем составе урацил. При этом UDG эффективно гидролизует урацил из одно- и двухцепочечных молекул ДНК во время постановки реакции, предотвращая, таким образом, амплификацию продуктов предшествующих ПЦР и получение ложноположительных результатов. UDG полностью инактивируется в процессе первого цикла денатурации ДНК и не препятствует амплификации продуктов текущей реакции.

Использование 5X Fast Probe qPCR Mastermix при проведении ПЦР-РВ обеспечивает получение воспроизводимых результатов с высокой чувствительностью (единичные копии ДНК) при определении количества геномной, плазмидной, вирусной ДНК. 5X Fast Probe qPCR Mastermix U обеспечивает проведение мультиплексных ПЦР-РB (до 5 одновременно-детектируемых мишеней). При постановке мультиплексных реакций рекомендуется оптимизация количества олигонуклеотидов и зонда для каждой мишени.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

• Мультиплекс ПЦР-РВ
• Рутинная ПЦР
• Низкокопийная ПЦР
• ПЦР-РВ с Тaqman-дизайном зондов

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
Для уменьшения ошибки пипетирования при постановке нескольких параллельных реакций рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс, содержащий все компоненты смеси (воду, 5x Fast Probe qPCR U Mastermiх и праймеры) за исключением ДНК-матрицы. Объем ПЦР-премикса рассчитывается исходя из числа реакций с добавлением одного дополнительного образца. После того, как аликвоты ПЦР-премикса будут внесены в предварительно промаркированные ПЦР-пробирки, в них добавляют соответствующую ДНК-матрицу.

1. Перед использованием разморозить и перемешать все компоненты ПЦР-смеси.
2. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 25 мкл.

Таблица 1. Состав реакционной смеси для ПЦР амплификации длинных фрагментов (50 мкл) (Примечание в источнике: в заголовке указано 50 мкл, в тексте и таблице — расчет на 25 мкл)

В зависимости от особенностей используемой ДНК-матрицы и задач исследования, состав реакционной смеси может быть оптимизирован:

• оптимальная концентрация праймеров может находиться в диапазоне 0,05-1 мкм;
• на одну реакцию объемом 25 мкл рекомендуется использовать 1 пг 10 нг плазмидной, фаговой или бактериальной ДНК; 0,1-100 нг геномной эукариотической ДНК.

Рекомендуется дополнительно включать в анализ NTC (no template control) - pеакцию, содержащую все компоненты реакции кроме ДНК-матрицы. Допускается использование праймеров и зондов с другой начальной концентрацией. Рекомендуемый объем ПЦР-смеси для одной реакции 25 мкл. Однако при необходимости объем реакционной смеси может быть изменен с сохранением конечной концентрации входящих в нее компонентов.

1. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки.
2. Провести ПЦР согласно таблице 2.

Таблица 2. Рекомендуемые условия амплификации для ПЦР в «реальном времени»
Буфер для хранения и разведения: 20 мм Трис-HCl (pH 8,0); 100 мм КСІ; 0,5 ММ ЭДТА; 50% глицерин, 0,5% Tween-20

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

• Транспортировка допускается до 14 дней при температуре не выше 4-8°C.
• Срок годности при соблюдении условий хранения: год с даты производства при температуре от -24°C до -16°C.
• Допускается заморозка/оттаивание 5X Fast-Probe qPCR U Mastermix не более 10 раз.
• Рекомендуется приготовить аликвоты 5X Fast-Probe qPCR U Mastermix удобного объема для однократного использования.

ФАСОВКИ


Смотреть
Скачать