ПЦР смесь 5Х One-Step RT-PCR Mastermix

Преимущества:
• Высокая чувствительность вплоть до единичных копий РНК в образце
• Синтез кДНК с последующей ПЦР в одной пробирке
• Защита РНК-матрицы от деградации
• Повышенная устойчивость к ингибиторам
• Точная RT-PCR для детекции SARS-CoV2 инфекции

Область применения:
• Высокочувствительная ПЦР
• ПЦР в реальном времени с флуоресцентными зондами
• Мультиплексная ПЦР
• Рутинная ПЦР

Рекомендации к использованию:
Допускается 10 циклов заморозки/разморозки.

Условия хранения и транспортировки:
● От -24°С до -16°С – 1 год
● От +2°С до +8°С – 7 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
5Х One-Step RT-PCR Mastermix представляет собой готовую к использованию смесь для получения кДНК с последующей количественной и/или качественной ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (далее ОТ-ПЦР). При этом синтез кДНК и ПЦР осуществляется в одной пробирке.

Использование 5Х One-Step RT-PCR Mastermix для проведения ОТ-ПЦР обеспечивает получение воспроизводимых результатов с высокой чувствительностью (единичные копии РНК).

5Х One-Step RT-PCR Mastermix содержит все основные реагенты, включая ревертазу c «горячим стартом», термостабильную ДНК-полимеразу с «горячим стартом», дНТФ и оптимизированный буфер.

В состав 5Х One-Step RT-PCR Mastermix входит генетически модифицированная ревертаза MMLV (#E-RTH-50, БелБиоЛаб) с подавленной активностью РНКазы Н и повышенной термостабильностью, а также улучшенной эффективностью при использовании GC-богатых РНК-матриц, что приводит к увеличению выхода кДНК.

Кроме того, в состав 5Х One-Step RT-PCR Mastermix входит инактивированная антителами ДНК-полимераза (#TDP-50, БелБиоЛаб), которая не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления реакционной смеси и ревертирования, что приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

• Мультиплекс ОТ-ПЦР
• Рутинная ОТ-ПЦР
• Низкокопийная ОТ-ПЦР
• Высокоспецифичная ОТ-ПЦР

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
Для уменьшения ошибки пипетирования при постановке нескольких параллельных реакций рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс, содержащий все компоненты смеси (5Х One-Step RT-PCR Mastermix, зонд, праймеры).

1. Перед использованием разморозить и тщательно перемешать все компоненты ПЦР-смеси.
2. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 25 мкл.

Таблица 1. Состав реакционной смеси для ПЦР амплификации длинных фрагментов (25 мкл)


В зависимости от особенностей используемой ДНК-матрицы и задач исследования, состав реакционной смеси может быть оптимизирован:
- оптимальная концентрация праймеров может находиться в диапазоне от 0,05 до 1мкМ;
- на одну реакцию объемом 25 мкл рекомендуется использовать 1 пг – 5 мкг тотальной РНК или 10 пг – 500 нг мРНК.

Рекомендуется дополнительно включать в анализ NTC (no template control) – реакцию, содержащую все компоненты реакции кроме РНК-матрицы. Допустимо приготовление реакционной смеси при комнатной температуре.

3. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки.
4. Провести ОТ-ПЦР согласно таблице 2.

Таблица 2. Рекомендуемые условия амплификации для ПЦР в «реальном времени»

* – 10 минут ревертирования обеспечивают линейность детекции моноплексной мишени в пределах 101 – 109 копий на реакцию. При проведении мультиплесной детекции время ревертирования может быть увеличено до 30 минут;

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ
Хранить при температуре от -24°С до -16°С.
Транспортировка допускается при температуре от +2°С до +8°С в течении 7 дней.
Срок годности при соблюдении условий хранения – 1 год c даты производства.
Допускается заморозка/оттаивание 5Х One-Step RT-PCR Mastermix не более 10 раз.
Рекомендуется приготовить аликвоты 5Х One-Step RT-PCR Mastermix удобного объема для однократного использования

ФАСОВКИ


Смотреть
Скачать