Diamant TaqAD ДНК-полимераза

Преимущества:
• Амплификация ПЦР-фрагментов до 5 000 п.н.
•Одностадийная ОТ-ПЦР
• Тестовые наборы с предварительной амплификацией
• Реверсивный горячий старт

Область применения:
●Мультиплексная ПЦР
●Рутинная ПЦР
●Высокочувствительная ПЦР
●ПЦР с флуоресцентными зондами
●ПЦР с интеркалирующими красителями

Концентрация:
10 ед./мкл
Одной единицей определяется количество молекул фермента, включающих 15 нмоль дезоксинуклеотидтрифосфатов в растущую цепь ДНК за 30 минут при 74°С.

Буфер для хранения и разбавления:
20 mМ Tris-HCl (pH 8.0), 0.5 mМ EDTA, 100 mМ KCl, 50% glycerol, 0.5% Tween-20

Условия хранения и транспортировки:
●От -24°С до -16°С – 1 год
●От +2°С до +8°С – 14 дней

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА
ДНК-полимераза TaqAD представляет собой смесь высокоочищенной рекомбинантной ДНК-полимеразы Taq (Thermophilus aquaticus), специфического аптамера и моноклональных антител к данному ферменту. Благодаря наличию данных ингибиторов ДНК-полимераза TaqAD не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления ПЦР-смеси при комнатной температуре, что приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. При этом активация фермента происходит в процессе первого цикла денатурации ДНК.

ДНК-полимераза TaqAD обеспечивает высокий выход ПЦР-продукта при использовании различных ДНК-матриц, применение технологии Hot-start позволяет значительно снизить риск неспецифической амплификации.

ДНК-полимераза TaqAD может поставляться в комплекте с буфером А, состав которого оптимизирован для амплификации ДНК в стандартных условиях, а также раствором 50 мМ MgCl2.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
• Мультиплексная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиолаб для получения оптимального результата, например, из линеек Fast Probe или One-Step);
• Низкокопийная ПЦР;
• Высокоспецифичная ПЦР (рекомендуется использовать готовые смеси БелБиолаб для получения оптимального результата, например, с полимеразой Blitz);
• Одностадийная ОТ-ПЦР;
• ПЦР с интеркалирующими красителями (рекомендуем, M2-FDU-0.5).

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
Для уменьшения ошибки пипетирования при постановке нескольких параллельных реакций рекомендуется приготовить общий ПЦР-премикс, содержащий все компоненты смеси (воду, дНТФ, буфер А, ДНК-полимеразу, праймеры). Объем ПЦР-премикса рассчитывается исходя из числа реакций с запасом на ошибки пипетирования. После того, как аликвоты ПЦР-премикса будут внесены в предварительно промаркированные ПЦР-пробирки (рекомендуем пластик для ПЦР Omnitip и AHN), в них добавляют соответствующую ДНК-матрицу.

1. Перед использованием разморозить и тщательно перемешать все компоненты ПЦР-смеси
2. Приготовить реакционную смесь согласно таблице 1
3. Количество вносимых компонентов приведено для одной реакции объемом 25 мкл

Таблица 1. Состав реакционной смеси (20 мкл)


4. Аккуратно перемешать реакционную смесь и осадить капли со стенок пробирки
5. Провести ПЦР

Стандартная схема амплификации представлена в таблице 2

Таблица 2. Программа амплификации (для ПЦР с двумеченными зондами)

* в зависимости от температуры плавления праймеров
** длина амплифицируемого фрагмента не должна превышать 5 000 п.о. (в случае ПЦР в «реальном времени» эту стадию можно опустить)

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Транспортировка допускается до 7 дней при температуре не выше 25°С
Срок годности при соблюдении условий хранения при температуре от -24°С – -16°С – 1 года c даты производства

Буфер для хранения и разведения
20 мМ Трис-HCl (pH 8,0); 100 мМ KCl; 0,5 мМ ЭДТА; 50 % глицерин; 0,5 % Tween-20

10Х буфер A
650 mM Трис-HCl (pH 8.8), 166 mM (NH4)2SO4, 0,5 % Tween-20

Смотреть
Скачать