Рекомбинантная ДНК-полимераза phi29 — это классический фермент, который предназначен для использования в обычных приложениях изотермической амплификации ДНК при умеренной температуре (на основании активности замещения цепи). Фермент поставляется с оптимизированным высокоэффективным буфером. Пользователь добавляет дНТФ, матрицу и праймеры. Данная полимераза высокоактивно замещает цепи и эффективно катализирует полимеризацию в направлении 5'–3' при температуре около 4–35 °C, обеспечивая синтез ДНК от незначительных количеств до масштабного выхода реакции, вплоть до визуально заметного увеличения вязкости реакционной смеси. Экзонуклеазная активность этого фермента в направлении 3'–5' выражена сильно (корректирующая), а в обратном — отсутствует. Phi29 может разрушать праймеры, поэтому в положении 3' рекомендуется использовать праймеры, устойчивые к экзонуклеазе. Фермент может инактивироваться нагреванием, устойчив к дУТФ и продуцирует ДНК с «тупыми» концами.