5Х Fast probe qPCR U Mastermix представляет собой готовый к использованию реагент для полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-РВ). В состав реагента входят следующие компоненты: термостабильная ДНК-полимераза с горячим стартом, дНТФ (включая дУТФ), урацил-ДНК-гликозилаза (UDG), MgCl2, оптимизированный для ПЦР буфер. Использование инактивированной ДНК-полимеразы, которая не обладает ферментативной активностью в условиях приготовления ПЦР-смеси, приводит к повышению специфичности и чувствительности реакции. Активация фермента происходит автоматически в процессе первого цикла денатурации ДНК. Наличие в реакционной смеси дУТФ приводит к тому, что все продукты амплификации будут содержать в своем составе урацил. При этом UDG эффективно гидролизует урацил из одно- и двухцепочечных молекул ДНК во время постановки реакции, предотвращая, таким образом, амплификацию продуктов предшествующих ПЦР (ампликонов), что позволяет избежать получения ложноположительных результатов. UDG полностью инактивируется в процессе ПЦР и не препятствует амплификации продуктов текущей реакции.
Дополнительно мастер-микс может содержать калибратор ROX или красители и другие реагенты для нанесения амплификационной смеси на гель для последующей детекции результатов методом электрофореза.